Programa de Estudios de Ingeniería Genética (2017)
Universidad: Universidad Nacional de Tucumán (Argentina)
Facultad: Bioquímica, Química y Farmacia
Profesor: Raúl Armando Salomón

PROGRAMA DE INGENIERIA GENETICA 2017

 

1.      Conceptos estructurales sobre el DNA. Principios básicos del clonado molecular. Sistemas de restricción-modificación. Enzimas de restricción: clasificación, nomenclatura, acción, interacción con el sitio de reconocimiento. DNA ligasa. Mecanismo de acción.

2.      Plásmidos. Rasgos esenciales. El replicón y el origen de replicación. Modelo de replicación plasmídica Clasificación de los Plásmidos. Vectores plasmídicos. Estrategias para el clonado en vectores plasmídicos. Vector Topo. Vectores eucariotas

3.      Estructura del bacteriófago lambda (l). La infección. El ciclo vital. Ciclo lítico y el estado de lisogenia. Morfogénesis del fago l. Biología molecular del bacteriófago lambda (l). Vectores basados en el fago l. Clonado en bacteriófago l. Clonado en cósmidos. Selección de fagos recombinantes. Clonado en cromosomas artificiales de levadura.

4.      Preparación de sondas marcadas de DNA y RNA. Síntesis de sondas de DNA de doble cadena uniformemente marcadas. Síntesis de sondas de RNA. Sondas oligonucleotídicas sintéticas. Condiciones para la hibridización de sondas oligonucleotídicas. Análisis de DNA genómico por hibridización de Southern.

5.      Construcción de bibliotecas de genes o genotecas. Genotecas genómicas y de cDNA.  Métodos de síntesis de cDNA. Estrategias para el clonado de cDNA y fragmentos de DNA en general. Selección de clones. Identificación de clones recombinantes. Identificación de clones específicos. Selección directa. Selección mediante hibridación con sondas de ácidos nucleicos. Selección mediante técnicas inmunológicas.

6.      Extracción, purificación y análisis de RNA mensajero de procariotas y eucarióticas. Hibridización de Northern. Análisis de ESTs (Expressed Sequence Tags). Análisis por Differential Display (DD-RT-PCR). Enzimas de interés. Mapeo de RNA con nucleasa S1. Análisis de RNA por extensión de cebador. RNA walking. Método 5’ y 3’ RACE y RLM-RACE (Rapid Amplification cDNA Ends).

7.       Secuenciación de DNA. Método de Maxam y Gilbert. Método de terminación de cadena de Sanger. Ventajas y desventajas. Análisis de secuencias nucleotídicas. Búsquedas de homologías en bases de datos. Aplicaciones: proyectos genoma.

8.      El genoma humano. Definición de genoma. Historia del proyecto genoma humano. Los dos proyectos. Organización molecular del genoma humano. Estructura del genoma. Variaciones en la secuencia de los genomas de distintas personas. 

9.      Amplificación in vitro de DNA mediante la Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR). Fundamento. Factores que afectan la amplificación. Método de amplificación. Aplicaciones.

10.   Técnicas de Identificación de polimorfismos en el ADN por amplificación al azar (RAPID), Polimorfismos en la longitud de fragmentos amplificados (AFPL), Polimorfismos en la longitud de fragmentos de restricción (RFLP), PCR en Tiempo Real (qRT-PCR): Tipo de sondas. Fundamento y aplicaciones.

11.  Optimización de la expresión de genes clonados en Escherichia coli. Proteínas recombinantes obtenidas de bacterias.

12.  . Clonado reproductivo y terapéutico mediante transferencia nuclear de células somáticas. Generación de animales transgénicos. Metodología. Aplicaciones en investigación y en la producción de proteínas de interés farmacéutico.

13.  Ingeniería genética de plantas. Cultivo de tejidos. Métodos físicos y biológicos de transformación. Vectores utilizados. Estrategias de la transformación. Etapas de la transformación. Análisis de transformantes. Ejemplos.

 

PROGRAMA DE TRABAJOS PRACTICOS

 

1 “Extracción del DNA plasmídico de una bacteria y análisis electroforético en gel de agarosa”.

2 “Preparación de células competentes y transformación con DNA plasmídico”.

3 “Transducción: un método de transferencia genética”

4- “A- Aislamiento y caracterización fenotípica de las células transformadas. B-  Manejo de software como herramienta en Biología Molecular.”

5- “Problemas de Ingeniería Genética: aplicaciones

 

BIBLIOGRAFÍA

 

-Sambrook, J., E. F. Fritsch, and T. Maniatis. 1989. Molecular cloning: a laboratory manual. Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor, N. Y.

 

-Glick, B. R., and Pasternak, J. J. 1998. Molecular biotechnology: principles and applications of recombinant DNA. ASM Press, Washington, DC.